高速逆流色谱仪配液分液步骤

 

配液

选择好一定比例的各种溶剂，量取特定体积，加入到干净分液漏斗中，摇匀（摇匀过程中注意放气），静置10min左右。

如我们配制正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水（1：1：1：1,v/v）的液体约200mL，分别量取50mL正己烷，乙酸乙酯，甲醇，水加入分液漏斗摇匀，静置即可。

分液

将分层好的上下两相分别盛入两个干净的试剂瓶中。

脱气

将分别盛有上下两相的液体的试剂瓶放入超声脱气机中，脱气20min。这一步主要是为了防止在高速逆流色谱仪工作的过程中产生气泡。

平衡

首先开启水浴保证温度，然后将固定相以一定流速泵入色谱仪中，待到出液口有液体流出即可。使机器运转，再以一定流速泵入流动相。当出液口有流动相流出时，即达到平衡。

进样

停泵，将六通阀旋转到load端，用注射器（哈哈，不是进样器，普通注射器即可）将六通阀内空气吹尽，抽取样品（样品用流动相或固定相溶解），样品充满整个进样圈即可。然后将六通阀旋转到inject端，开泵，同时检测器开始记录。

收集

按要求收集馏分即可。

后处理

一般采用旋转蒸发仪蒸干即可。

逆流色谱的应用

逆流色谱的应用主要有天然植物有效成分分离，海洋生物活性成分的分离，抗生素分离，蛋白质分离等等。